CONTROL DE CALIDAD INTERNO EN MICROBIOLOGIA
I. INTRODUCCION
El laboratorio clínico de microbiología, requiere para su correcto funcionamiento un adecuado y constante control de calidad sobre todas las etapas en el recibo, manejo y reporte de especimenes clínicos. En general este control debe identificar, monitorear, evaluar y aprobar metodologías relativas al cuidado del paciente.
En este contexto el control de calidad en Microbiología Clínica envuelve el monitoreo de los medios de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para asegurar una adecuada práctica en el aislamiento, identificación y caracterización de agentes etiológicos y su correspondiente prueba de susceptibilidad como una guía de la terapia.
Un programa de control de calidad debe incluir además un Manual de Procedimientos, validación de metodologías y equipos, el desarrollo de ciclos de educación continua, elementos de bioseguridad y una supervisión sobre los reportes generados.
En éste sentido se hace énfasis en la correcta valoración de las pruebas de laboratorio, los agentes causales de enfermedades, el conocimiento de la flora normal, la taxonomía bacteriana y la interpretación correcta de las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos.
El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo, que el producto final del trabajo tenga un grado aceptable de confiabilidad con los límites establecidos. Debido a que la mayoría de los resultados en microbiología son producto de interpretaciones y evaluación de reacciones bioquímicas de seres vivos, donde la capacidad y experiencia del evaluador tienen un gran valor, los cálculos de coeficientes de variación y desviaciones estándares que son parte de funciones analíticas, tienen poca aplicación en el laboratorio de microbiología.
II. JUSTIFICACIÓN
La calidad debe ser la guía en el que hacer diario de un laboratorio, porque asegura que los resultados generados sean confiables, reconocidos y aceptados. Es responsabilidad de la dirección del laboratorio establecer los mecanismos rutinarios de control de calidad y definir su frecuencia.
Existen dos tipos de control: un control interno llevado a cabo por el propio personal de laboratorio y un control externo donde la participación corresponde a personal ajeno al propio laboratorio.
Este último se hace utilizando materiales de referencia, que son enviados a los laboratorios que participan en la red de control de calidad.
La calidad del resultado depende, de un conjunto de factores que el laboratorio debe tratar de controlar, sin tener a veces, la posibilidad de intervención directa en algunos de esos factores tales como:
La justificación de la toma de una muestra.
La utilización de la técnica y del material apropiado para la toma de la muestra.
Las condiciones apropiadas para el transporte o el envío de la muestra (medios de transporte, temperatura, condiciones de espera).
La técnica apropiada para la siembra de la muestra (medios de cultivo, temperatura, factores de crecimiento, etc.).
La calidad de los medios utilizados, para que los resultados sean reproducibles.
Las pruebas de identificación idóneas, con buena sensibilidad (el uso rutinario de cepas de referencia).
La correcta interpretación de los resultados y su reporte adecuado por parte del personal.
La interpretación correcta de los resultados por parte del médico.
Para que los resultados obtenidos posean una buena calidad diagnóstica, deben contener los siguientes criterios:
Fiabilidad o exactitud lo cual se traduce en un resultado correcto. Para ello existen dos tipos de pruebas:
Pruebas cuantitativas: Se miden por el grado en que los resultados se acercan al valor verdadero. Ejemplo: Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de los antibióticos “in vitro”.
Pruebas cualitativas: La exactitud se mide determinando si el resultado es correcto. Ejemplo: Identificación de agentes patógenos.
Reproducibilidad o precisión: Cuando se repite la prueba, se obtiene el mismo resultado. En pruebas microbiológicas, esto se dificulta por la falta de homogeneidad y estabilidad en una muestra clínica
Rapidez y eficiencia: capacidad de entregar rápidamente los resultados fidedignos.
La calidad de los resultados es afectada por los siguientes factores:
La capacitación del personal profesional.
La calidad de los materiales y equipos: dotación suficiente, preparación y mantenimiento apropiados.
El cumplimiento de las normas de bioseguridad
La transmisión oportuna de los resultados: boletas correctamente completadas, datos transcritos de manera legible.
III. OBJETIVOS
Implementar un programa de control interno de la calidad en el Laboratorio de Referencia Regional en Salud Publica de la DIRESA Lima.
Lograr una estandarización de los métodos y materiales empleados para el procesamiento de una muestra microbiológica.
IV. RESPONSABLES
Jefe o coordinación del servicio de microbiología ( Unidad, area )
Coordinación de control de calidad del servicio de microbiología
V. ACTIVIDADES
1. Control de calidad de medios de cultivo
Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos y la absorción de agua del exterior, así como la formación de agua dentro de la botella como consecuencia de las fluctuaciones de temperatura en el ambiente, favorece el crecimiento bacteriano. Esto puede conducir al consumo de nutrientes, variaciones de Ph y cambios en el color del medio.
Además la exposición a la luz puede llevar a importantes alteraciones en los constituyentes del medio de cultivo.
Teniendo en cuenta los factores antes señalados, los medios de cultivo deshidratados deben almacenarse siempre en lugares frescos, a temperatura ambiente y protegidos contra la humedad y la luz.
Los medios elaborados en polvo tienen una vida útil de al menos 3 años. El material que ha sufrido cambios substanciales, tales como hidratación, endurecimiento y cambio de color, deben descartarse.
Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo deshidratado, con el nombre del producto, nombre de la casa proveedora, número de control del frasco, fecha de expiración, número de lote y fecha en que se abrió el frasco.
El grado de disolución de un medio deshidratado, así como la eficacia del mismo ya preparado, depende en gran medida del procedimiento empleado en la rehidratación.
Se recomienda utilizar agua recién destilada o completamente desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble del medio que se quiere preparar. Si el medio va a distribuirse en tubos, debe agitarse constantemente para asegurar una adecuada homogenización al momento de servirlos.
Cuando se va a esterilizar el medio de cultivo, debe asegurarse en seguir las instrucciones de tiempo, presión y temperatura para la obtención de medios de cultivo óptimos. Una temperatura de 121 °C , presión de 15 libras y un tiempo de esterilización de 15 minutos, son suficientes para la mayoría de los medios.
El medio esterilizado debe ser enfriado a 45°-60°C en un baño maría, para
evitar la formación de agua de condensación.
Al ser vertidos en las placas Petri, evitar la formación de burbujas y coágulos.
Durante el proceso de servida, debe tomarse una muestra del medio para realizar el control de calidad por esterilidad y eficiencia.
El medio de cultivo reconstituido tiene una vida útil limitada. Si no se emplea de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para garantizar su utilidad durante un periodo de tiempo.
El almacenamiento a 4°C es el mejor para la mayoría de los medios, sin embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a temperatura ambiente.
Los medios deben mantenerse preferiblemente en sitios oscuros, ya que la luz puede afectar algunos de sus componentes. Para evitar la desecación se aconseja que se guarden en bolsas plásticas bien cerradas. Las placas Petri almacenados así, deben mantenerse con el fondo hacia arriba.
Dado que los medios almacenados en refrigeración, cuando pasan a temperatura ambiente tienden a formar agua de condensación en la superficie, se recomienda poner las placas Petri en la incubadora a 35°C por 2 horas, colocándolos con el fondo hacia arriba para obtener una superficie seca.
Esto es particularmente importante para que el agua no afecte la individualidad de las colonias en el aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los que el exceso de agua puede afectar la dilución de las colonias y por ende la lectura del halo de inhibición.
Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso rutinario, por eficiencia o calidad, mediante la inoculación de microorganismos cuyo comportamiento conocemos, tanto para reacciones positivas como negativas.
Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domésticas o cepas control comerciales (ATCC).
Se debe guardar un libro de registro de los resultados obtenidos.
1.1 Control de esterilidad
Se controlara el 5 -10 % del lote de medios preparados a 35ºC por 48 horas, si el porcentaje de placas contaminadas es mayos al 10% se descartara el lote completo
1.2 Controles de eficacia
Controlar el crecimiento de las bacterias a evaluar y que muestre resultados aceptables en pruebas de sensibilidad, se utilizaran cepas ATCC
1.3 Control de pH:
Se controlara el pH del medio en cada lote de preparación, teniendo como rango de 7.2 a 7.4 despues de gelificar a temperatura ambiente
1.4 Profundidad del agar
El estandar es de 4 mm
Se utilizara un vernier o una aguja con la marca de la medida y probar en cuatro cuadrantes y el centro de la placa
· 60 – 70 ml de agar para placa de 150 mm
· 25 – 35 ml de agar para placas de 100 mm
1.5 Contenido de timidita
La excesiva cantidad de timidita puede revertir los efectos inhibitorios de las sulfonamidas y trimpetoprim.
Se debe de evaluar cada lote de Mueller Hinton utilizando una cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212 o alternativamente Enterococcus faecalis ATCC 33186 confrontada con el disco de sulfatrimetropim de 25 ug el halo de inhibición debe ser mayos a 20mm
1.6 Contenido de calcio, magnesio
Estándar: calcio ++ :20 – 25 mg/L
Magnesio ++ :10 – 12.5 mg/L
Concentraciones mayores a estos afectaran:
· Colistin y tetraciclinas: Aumentaran su actividad
· Aminoglucosidos: Disminuyen su actividad
Exceso de Zinc afecta a:
· Carbapenem el cual disminuye su actividad
Cepa control:
· Pseudomona aeruginosa ATCC 27853 se enfrentara con disco de gentamicina de 10ug, el halo de inhibición debe ser de 16 a 21 mm
1.7 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
1.8 Periocidad del control:
Cada vez que se prepare un lote de medios de Cultivo.
1.9 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la calidad de los medios
1.9.1 Contaminación de las placas de cultivo:
· Realizar descontaminación del área de trabajo
· Realizar el control de contaminación de la incubadora, tal como se describe en el manual de microbiología del Laboratorio de Referencia Regional de la DIRESA LIMA
· Verificar el buen uso del autoclave
1.9.2 Acción correctiva en relación al pH:
· Si el pH del medio de cultivo no esta en el rango requerido, debe ser ajustado dependiendo del caso con soluciones estériles de ClNa 0,1normal ò HCl 0,1 normal
· Medir el Ph por encima de los 25°C.
· Sobrecalentamiento en la esterilización, vuelta a fundir o calentamiento prolongado a 50°C.
· Solución incompleta del medio.
· Mala calidad del agua.
· Recipiente mal lavado o con residuos químicos.
· Mala conservación del medio deshidratado o vencido
1.9.3 Contenido de timidita
Si existe concentraciones elevadas de timidita se deberá corregir añadiendo plasma de caballo al 3%, esto eliminara el excedente ya que el plasma contiene timidita fosforilada
1.9.4 Contenido de calcio y magnesio
Se deberá de verificar la cantidad de cationes divalentes en el inserto del frasco muy independiente de la verificación práctica, en el caso que exceda la cantidad máxima permitida se deberá de rechazar el frasco de medio de cultivo.
1.9.5 Turbidez o precipitación :
· Mala calidad del agua.
· Sobrecalentamiento.
· Ph incorrecto.
· Solución incompleta.
1.9.6 Oscurecimiento :
· Sobrecalentamiento.
· Solución incompleta.
· Alteración del Ph.
1.9.7 Gel blando :
· Bajo porcentaje de agar en el medio.
· Errores en la pesada del medio deshidratado o en los suplementos.
· Sobrecalentamiento.
· Mala homogenización del medio.
· Exceso de agua.
1.9.8 Crecimiento bacteriano pobre :
· Exceso de calentamiento.
· Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.
· Alteración en el Ph.
1.10 Registro:
Anexo 1
2. Control de calidad de tubos con medios bioquímicos
El control de calidad de los tubos Bioquímicas se deberá realizar usando cepas ATCC, esperando obtener los resultados que se observan en la tabla:
TSI E. coli ácido/ácido
TSI Shigella flexnerii alcalino/ácido
TSI Pseudomona aeruginosa alcalino/alcalino
SIM Proteus mirabilis movilidad positiva
SIM K. pneumoniae movilidad negativa
Citrato K.pneumoniae color azul. Crece
Citrato de Simmons E. coli Color verde no crece.
Caldo de urea Proteus Rojo-Morado. Positivo.
Caldo de urea E. coli Color Naranja. Negativo.
2.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
2.2 Periocidad del control:
Cada vez que se prepare un lote de medios de Cultivo.
2.3 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la calidad de los medios bioquímicas.
2.3.1 Contaminación de las tubos de cultivo:
· Realizar descontaminación del área de trabajo
· Realizar el control de contaminación de la incubadora, tal como se describe en el manual de microbiología del Laboratorio de Referencia Regional de la DIRESA LIMA
· Verificar la esterilización de los tubos colocando un papel indicador en cada esterilización del material
2.3.2 Acción correctiva en relación al pH:
· Si el pH del medio de cultivo no esta en el rango requerido, debe ser ajustado dependiendo del caso con soluciones estériles de ClNa 0,1normal ò HCl 0,1 normal
2.3.3 Calidad del medio
· Verificar la profundidad de los tubo el cual debe de tener 3.5 cm y la cuña de 2.5 cm de largo
· Medios que no estén fuera de la fecha de vencimiento
2.4 REGISTRO
ANEXO 2
3. CONTROL DE CALIDAD DE IDENTIFICACION
3.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
3.1 Periocidad del control:
El control de calidad de la identificación microbiológica se realizara bimestralmente, en el cual estará comprendida la identificación de especie, género y reacciones bioquímicas.
3.2 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la identificación
3.2.1 Reacción Bioquímica inadecuada:
· Verificar la reacción del control de calidad de los medios en tubo
3.2.2 Problemas con las cepas a estudiar
· Verificar que las cepas estén controladas y no estén muy deterioradas (envejecidas)
3.2.3 Control de calidad de pureza y viabilidad:
Este control se realizara a diferentes niveles del proceso; a simismo, se desempeñara cada vez que se realice un replique. con el fin asegurarse que las cepas conservan su viabilidad y sus caracteres bioquímicos.
3.3 REGISTRO
ANEXO 3
CONTROL DE CALIDAD DE ANTIBIOGRAMA
4.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
4.2 Periocidad del control:
El control de calidad de la susceptibilidad antimicrobiana se realizara diariamente por 30 días, en el cual se verificara que los diámetros obtenidos no estén fuera de los diámetros permitidos.
4.3 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la susceptibilidad
Procedimientos:
4.3.1 Control Diario:
Para cada combinación bacteria/antimicrobiano solo uno de cada 20 ensayos consecutivos puede estar fuera de los limites permitidos, caso contrario se requiere acciones correctivas
4.3.2 Control semanal:
· Primero se deberá demostrar una eficiencia satisfactoria para las pruebas diarias
· Para pasar del control diario al semanal, no mas de tres de cada 30 diametros de inhibición obtenidos diariamente puede estar fuera de los limites aceptables para cada combinación bacteria/antimicrobiano
· Continuar con el control de calidad u a vez por semana y cada vez que se cambie algún reactivo .
PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD DIARIO
PRUEBA DIARIA
1/20 Fuera Del Rango aceptable
Acciones correctivas
Repetir la prueba el mismo día
Continuar con las pruebas diarias
Razón: Error obvio
Resultados dentro del rango: continuar con las pruebas diarias
Acciones correctivas inmediatas
Repetir la prueba el mismo día por 5 días consecutivo
Resultados dentro del rango aceptable
Acciones correctivas adicionales
Investigar posible fuente del error
Continuar con las pruebas diarias
SI
NO
SI
NO
SI
NO
PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD SEMANAL
Prueba Durante 30 Días Consecutivos
Razón: Error Obvio
Acciones correctivas adicionales
Repetir la prueba el mismo día
Continuar con las pruebas semanales
Al menos 1 de las pruebas semanales fuera del rango
Acciones correctivas
Repetir la prueba el mismo día por 5 días consecutivo
Acciones correctivas inmediatas
Investigar posible fuente del error
SI
NO
SI
NO
SI
NO
<=3/30 Resultados: fuera del rango aceptable Implementar controles semanales Resultado dentro el rango Continuar con las pruebas semanales Todos los resultados dentro del rango aceptable Continuar con las pruebas semanales NO NO SI SI 4.3.3 Halos de inhibición fuera del rango permitido · Verificar la fecha de vencimiento de los discos. · Verificar la temperatura de almacenaje de los antimicrobianos. · Los discos deben ser almacenados a un temperatura entre –20 y +8°C. · Algunos discos, especialmente los de antibióticos ß-lactámicos deben guardarse congelados a -20°C. Solo los viales en uso deben mantenerse a temperatura de refrigeración · Profundidad del Agar mayor a 4 mm · Concentración del inoculo superior al 0.5 de Mc farland · Al sacarlos de la refrigeradora para su uso, espere a que los viales alcancen la temperatura ambiente por 1 a 2 horas. · Siempre utilice primero los viales con fecha de caducidad más próxima. · Siempre que un cartucho a sido extraido del paquete, éste debe guardarse en un desecador que cierre perfectamente. · Cuando se utilice el aparato dispensador que contiene los discos deberá mantenerse siempre refrigerado. · Los discos son colocados en el medio a una distancia de más de 24 mm del centro de uno al centro del otro. En todo caso no colocar más de 12 discos en una placa de 150 mm, ni más de 5 discos sobre la placa de 100 mm. · Procurar no colocar discos de antibióticos bactericidas ( Ej. Penicilina, Cefalosporinas, Aminoglicósidos, Vancomicina ) al lado de antibióticos bacteriostáticos ( Ej. Cloranfenicol, Tetraciclina, Sulfonamidas ) para evitar el antagonismo antibiótico. · Colocar las placas en la incubadora dentro de los 15 primeros minutos después de su aplicación. · Para verificar el estado de los discos de sensibilidad, utilice cepas control ATCC, las cuales son seleccionadas por su estabilidad genética y por su utilidad en el método utilizado. Estas cepas se corren como una muestra más y se correlaciona el tamaño de los halos de inhibición con las medidas expresadas en los Manuales NCCLS M2-A6.
4.3.4 Halos de inhibición que presentan resistencia
· Verificar si la cepa estudiada presenta enzimas de resistencia a antibióticos ya sea betalactamicos, carbapenemasas, u otras resistencias
4.3.5 Problemas con las cepas a estudiar
· Verificar que las cepas estén controladas y no estén muy deterioradas (envejecidas)
· Verificar la reacción del control de calidad de los medios en tubo
· Verificar que las cepas estén controladas y no estén deterioradas (envejecidas)
4.3.6 El Estandar Mc farland:
· La densidad de la turbidez del Estándar McFarland deberá ser verificada utilizando un espectrofotómetro con dirección de luz de 1 cm y cubetas adecuadas para determinar absorbancia.
· Para realizar el control de un estándar McFarland de 0.5 , la absorbancia deberá leer entre 0.08 a 0.10 a una longitud de onda de 625 nm.
· Antes de ser usados, los patrones deberán agitarse para una adecuada homogenización.
· Mensualmente los patrones son descartados y vueltos a preparar, o en su defecto se debe comprobar su densidad.
4.3.7 Habituales causas de error en la prueba de susceptibilidad:
· Error administrativo en la transcripción de los datos del control de calidad.
· Lectura errónea al medir el diámetro de la zona.
· Contaminación u otros cambios en la cepa control.
· Suspensión del inóculo demasiado fuerte o demasiado débil.
· Mala agitación del estándar McFarland o estándar dañado.
· Incorrecta temperatura, tiempo o atmósfera de incubación.
· Perdida de la potencia del disco durante su transporte, su manejo o su almacenaje en el laboratorio.
4.3.8 Control de calidad de la lectura e interpretación:
· Cuando se va a determinar la sensibilidad del S. Pneumoniae a la Penicilina, utilizar un disco de Oxacilina de 1 µg.
· Las cepas de S. Pneumoniae con zonas de Oxacilina de >/- a 20 mm son susceptibles a penicilina ( CIM desarrollo de poca afinidad de las proteínas fijadoras de penicilina (PBP’s) o a la producción de betalactamasa. Las pruebas de difusión en disco pueden detectar con exactitud los aislamientos que poseen alteradas las PBP’s , pero no detectarán con fiabilidad las cepas productoras de betalactamasa. Estas últimas han de detectarse con pruebas directas de betalactamasa ( Ej. Cefinasa ).
· Las placas han de leerse con luz transmitida para visualizar cualquiera pequeña colonia dentro del halo, que haría la cepa resistente.
· Todo caso de Estafilococo resistente a la Vancomicina, debe ser
· confirmado, enviado a un laboratorio de referencia e informar a las Autoridades de Salud Pública.
· Si se observan colonias dentro de un halo de inhibición, deberá confirmarse la pureza de la cepa y repetir la prueba.
· La difusión (" swarming ") de los Proteus sp no es inhibida por todos los antibióticos, por lo que no se toma en cuenta.
· Ocasionalmente se pueden observar varias colonias esparcidas por una zona de inhibición. Este fenómeno es constante para la Serratia sp las colonias se considerarán significativas y la cepa resistente
· Solo es necesario probar una Tetraciclina y sus resultados son equivalentes a la Tetraciclina, Minociclina, Doxiciclina.
· Los resultados obtenidos con al Polimixina, pueden aplicarse a la Colimicina. Su halo es pequeño debido a su pobre difusión en agar.
· Los Estafilococos resistentes a la Meticilina, Oxacilina o Nafcilina, también puede ser informados como resistentes a la Penicilina, Cefalosporinas , carbapenem y la Cefalotina puede utilizarse para representar Cefalotina, Cefradina Cefaclor y Cefadroxil
· Los datos de sensibilidad al ácido nalidíxico, Nitrofurantoina, Norfloxacina, Sulfonamidas y Trimethoprim, se aplican solamente a cepas aisladas de infecciones urinarias.
· En cepas de Salmonella y Shigella, solo Ampicilina, una Quinolona y Trimethoprim/sulfametoxazol deben ser probados e informados de rutina en heces. Además el Cloranfenicol y una cefalosporina de tercera generación deben ser probados e informados en cepas de Salmonella sp extraintestinal.
· En cepas de Salmonella sp y Shigella sp, los aminoglicósidos y las cefalosporinas de primera y segunda generación, pueden aparecer como activos in vitro pero no son efectivos clínicamente y no deben ser informados como susceptibles.
· La prueba de la betalactamasa predice la resistencia a la Penicilina, Ampicilina y Amoxicilina.
· En los Enterococos sp las cefalosporinas, los aminoglicósido ( Excepto por resistencia de nivel alto ) trimetropim / sulfametoxazole a clindamicina pueden aparecer activos in vitro pero no son efectivos clínicamente y éstas cepas no deben informarse como susceptibles.
4.4 Registro:
ANEXO 4
CONTROL DE CALIDAD DE LA TINCIÓN
5.1 Procedimiento de control:
Se preparan portas de microscopio con una gota de una suspensión que contenga organismos Gram positivos y Gram negativos mezclados en diferentes proporciones.
Una vez seco, estas portas de microscopio pueden almacenarse para su empleo posterior como controles de la tinción Gram.
TINCION MICROORGANISMO REACCION ESPERADA
· Gram --- Estafilococo sp --- Morado--- Gram-Positivo.
· Gram --- E. coli --- Rosado--- Gram-Negativo.
· Gram --- Mezcla de ambos--- Mezcla de ambas colores.
· Zielh-Neelsen --- Mycobacterium sp --- Rosadas. ---BAAR positivo
· Zielh-Neelsen --- E. coli --- Azul. --- BAAR negativas.
· Verde malaquita --- Clostridium sp --- Espora de color verde.
· Verde malaquita --- E. coli --- Célula completa rosada.
5.2 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
5.3 Periocidad del control:
El control de calidad de los colorantes en microbiologia se realizara semanalmente, en la cual esta incluido la coloración Gram, coloración Giemsa, coloración Ziehl neelsen y otras coloraciones .
5.4 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la calidad de la tinción.
· El Violeta Cristal tiende a hacer precipitación, lo cual puede ser causa de observación de estructuras ficticias en el frotis. Si se observa precipitación, proceda a filtrar el tinte.
· La evaporación puede ser causa de mal funcionamiento de los tintes.
· Las placas que no han sido previamente limpiadas o con restos de grasa, pueden ser causa de mala fijación y tinción de la muestra.
· Sobrecalentamiento de la placa durante la fijación. El exceso de calor provoca un daño físico en la pared celular de las bacterias que puede afectar la retención de los colorantes.
· Lavado muy fuerte de la placa durante la tinción.
· Proporción no adecuada de los componentes de la tinción.
· Algunos tintes como Safranina y Fucsina básica pueden contaminarse. Si se sospecha esto , cultive 1 ml en Tioglicolato, o descarte el tinte.
· La tinción de Zielh-Neelsen tiene sus limitaciones en cuanto a no ser específica para micobacterias y su baja sensibilidad, ya que el nivel de detección es de 5,000 a 10,000 bacilos por mililitro de esputo. Esto debe ser tenido en cuenta al evaluar una placa.
· Una Cepa Control positiva, debe ser teñida cada vez que un nuevo lote de tintes para Zielh-Neelsen es preparado y cuando se reciba un nuevo pedido de tintes y reactivos. Se puede utilizar la cepa de Mycobacterium tuberculosis ATCC 25177 como control positivo.
5.5 Registro
Anexo 5
CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS DE LABORATORIO
Todos los instrumentos utilizados en el laboratorio clínico, deben estar amparados por un programa de control de calidad y de mantenimiento preventivo, basados en las instrucciones del fabricante y los procedimientos establecidos.
Un programa de mantenimiento preventivo es esencial para asegurar la exactitud y longevidad del instrumento. El chequeo periódico recomendado es importante para minimizar el daño o la necesidad de servicio y reparación. El jefe de laboratorio es responsable por el programa general, recayendo en el encargado de la sección la responsabilidad primaria en su área de trabajo.
6.1 Manual Estándar de Procedimientos Operacionales:
El Manual Estándar de Procedimientos Operacionales debe ser organizado por grupo de equipos.
Un listado de los equipos debe incluir: nombre, marca, modelo, número de serie, fecha de recibo y número de inventario de la institución.
El Manual debe incluir el récord de mantenimiento preventivo, periodicidad de la inspección y fallas del instrumento y debe estar accesible en todo momento.
6.2 Validación de Equipos:
Los nuevos equipos requieren estudios de validación para determinar que su funcionamiento es al menos comparables a los equipos existentes o a métodos de referencia. Estos equipos son aceptados solo si logran cumplir las metas mínimas de funcionabilidad y eficiencia al compararse con los existentes.
Este récord de validación debe mantenerse por toda la vida útil del equipo.
6.3 Manual de Instrucciones del Uso del Instrumento:
Estos Manuales deben estar incluidos en el Manual de Operaciones del instrumento, redactados en forma clara, en el idioma de los usuarios, inclusive la documentación del entrenamiento del personal.
Cada protocolo debe incluir precauciones de seguridad y los procedimientos de limpieza y cuidado del instrumento. Los Manuales deben incluir instrucciones básicas para resolver problemas menores y un récord de incidencias, que incluye el tipo de problema, los pasos tomados para resolverlo y la acción correctiva para evitarlo en el futuro.
6.4 Calibración del Instrumento:
Los equipos que requieren un exacto nivel de precisión para obtener un resultado seguro, requieren de una calibración periódica. La fecha de la calibración, frecuencia y resultado, deben ser mantenidos en un libro récord dentro del laboratorio.
6.5 Control de Calidad:
Todo equipo debe ser evaluado por un programa de Control de Calidad en base a las instrucciones del proveedor y las regulaciones internas del laboratorio. Debe mantenerse un libro récord de todo lo realizado al respecto, con el nombre del instrumento, fecha, resultado y comentarios. En otro capítulo se afianzarán los conceptos sobre éste tema.
6.6 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
6.7 Periocidad del control:
El control de calidad de los equipos de laboratorio se realizara de acuerdo a las especificaciones del fabricante, según se detallara a continuación .
6.8 Procedimientos y acciones correctivas
6.8.1 INCUBADORAS:
· Se controlara diariamente la temperatura de las incubadoras, antes de sacar las placas y se anotara en una hoja control el resultado.
· Coloque las muestras, placas y tubos, en una posición segura.
· Un papel de filtro humedecido con agua en el fondo de la incubadora, es adecuado para mantener la humedad requerida.
· El encargado de sección debe ser notificado cuando una incubadora falla en mantener el rango de temperatura aceptable.
· Observe macroscópicamente las placas Petri para observar desecación.
· Todas las incubadoras deben ser limpiadas mensualmente y llevar un récord de mantenimiento preventivo.
6.8.2 AUTOCLAVES:
Frecuencia: Semanal
· Examine récord de Temperatura y Presión
· Utilice Indicadores de Esterilización
· Récord de uso, fecha, temperaturas, presión
· Chequeo del nivel de agua
· Uso de Indicadores biológicos de Esterilidad
· Chequeo de la válvula de seguridad
· Limpieza del Interior y Exterior.
· Limpieza de la Pantalla de Temperatura
· Limpieza del drenaje y sellos
6.8.3 REFRIGERADORAS:
Frecuencia: Diaria
· Coloque las placas Petri en posición invertida con la tapa hacia abajo.
· Mantenga la temperatura entre 4 – 8 ° C.
· Utilice refrigeradoras que no hacen escarcha.
· No coloque medios de cultivo aún ligeramente calientes dentro de la refrigeradora.
· Evite abrir con frecuencia la puerta de la refrigeradora.
· Lleve un registro de problemas de funcionamiento, causa y solución.
· No guarde alimentos en refrigeradoras para especímenes clínicos.
6.8.4 MICROSCOPIOS:
Cuidados y mantenimiento Diario Mensual Semestral
· Limpieza del aceite de objetivos, condensador, etc
· Apagar la fuente de luz
· Colocar cobertor contra el polvo
· Limpieza de Ocular, condensador, diafragma con líquido de limpieza de lentes
· Limpieza y ajuste del sistema óptico
· Limpieza y ajuste del sistema lumínico
· Limpieza y lubricación del sistema mecánico
6.8.5 CENTRÍFUGAS:
Frecuencia: Mensual
· Verificar tubos con rajaduras
· Verificar por restos de vidrio o líquido dentro del portatubo o las copas
· Verificar por balance de cada lote
· Verificar por la temperatura de funcionamiento ( Refrigeradas )
· Limpieza de cualquier derrame
· Limpieza de la olla del rotor
· Limpieza externa
· Desinfección de la olla del rotor
· Verificación de brochas
· Chequeo del circuito eléctrico
· Certificación del velocímetro
Problemas y Limitaciones:
Vibración
· Chequear por balance apropiado.
· Chequear tamaño de los tubos.
· Mirar si la centrífuga está sobre una superficie plana.
Rotura
· Chequear tamaño de los tubos.
· Balance correcto.
· Verificar el interior de los portatubos
Desprendimiento de tapas:
· Utilice tapas de rosca.
· Si no es posible, use Parafilm sobre los tapones de caucho.
· Siempre que sea posible utilice tubos de plástico.
6.8.6 ANALIZADOR DE PH:
Frecuencia: Diaria
Los analizadores de pH normalmente deben ser calibrados antes de ser utilizados, a fin de garantizar la calidad y exactitud de las lecturas. Los procedimientos que se realizan son los siguientes:
· Calibración de un punto. Se realiza en condiciones de funcionamiento y uso normal, Utiliza una solución de referencia de pH conocido.
· Calibración de dos puntos. Se realiza si se requiere efectuar mediciones muy precisas, utiliza dos soluciones de referencia de pH conocido, Igualmente, si el instrumento se utiliza de forma esporádica y si el mantenimiento que recibe es eventual.
Descripción del proceso
Tabla de solución de problemas:
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
SOLUCION
El analizador de pH presenta lecturas Inestables.
Burbujas de aire en el electrodo.
Remojar el electrodo para eliminar las burbujas.
Electrodo sucio.
Limpiar el electrodo y recalibrar.
Electrodo muy superficial.
Verificar que la muestra cubre perfectamentela punta del electrodo.
Electrodo roto.
Reemplazar el electrodo.
La respuesta del electrodo es lenta.
Electrodo sucio o grasoso
Limpiar el electrodo y recalibrar.
La pantalla presenta mensaje de error.
Operación incorrecta o selección errónea del modo de operación.
Verificar modo de operación seleccionado. Seleccionar una operación válida.
La pantalla presenta mensaje de calibración o error.
Error de calibración.
Recalibrar analizador de pH.
Valor de buffer erróneo en la calibración.
Verificar los valores del buffer utilizado.
Electrodo sucio.
Limpiar electrodo y calibrar.
6.8.7 BALANZA ELECTRONICA DIGITAL:
Frecuencia: Anual
Acción:
· Calibrar la balanza y documentar el proceso.
· Desensamblar y limpiar los componentes internos.
· Se debe seguir el proceso definido por el fabricante, o contratarse una firma especializada para el efecto.
Tabla de solución de problemas:
Problema
Causa del problema
Solución
La balanza no enciende.
Cable de interconexión desconectado o mal ajustado en la balanza.
Revisar conexión. Ajustar cable conector si es del caso.
La toma eléctrica sin corriente electrica
Verificar alimentación eléctrica.
La lectura del peso es incorrecta.
La balanza no fue puesta en cero antes de la lectura.
Colocar en cero la balanza; repetir la medida.
La balanza mal calibrada.
Calibrar de acuerdo con el procedimiento recomendado
por el fabricante.
La balanza desnivelada.
Nivelar la balanza.
La balanza no muestra en pantalla las unidades deseadas de medida.
Unidades mal seleccionadas.
Revisar el procedimiento definido por el fabricante para seleccionar la unidad de medida requerida.
La unidad requerida no habilitada.
Habilitar la unidad de medida de acuerdo al procedimiento definido por el fabricante.
La lectura de la balanza es inestable.
Vibración en la superficie del mesón.
Colocar la balanza sobre una superficie estable.
Puerta frontal de la balanza abierta.
Cerrar la puerta frontal para efectuar la medición.
6.8.8 HORNO DE CALOR SECO:
Frecuencia: Semanal
Tabla de solución de problemas:
Problema
Causa probable
Solución
No hay energía
La estufa no está conectada
Conectar estufa a toma eléctrica
El interruptor de encendido se encuentra apagado
Accionar el interruptor de encendido.
Disyuntor defectuoso
Cambiar el disyuntor.
Tarjeta de control defectuosa
Sustituir tarjeta de control.
Cable conector abierto
Revisar/reparar cables conectores
Temperatura errática elevada
Controlador defectuoso
Sustituir controlador
6.9 REGISTRO
Anexo 6
CONTROL DE CALIDAD DEL ANALISTA:
El personal es el factor más importante en la calidad del trabajo en el laboratorio de microbiología. El personal debe tener una dedicación y actitud positiva hacia el trabajo, capacidad académica, actualización constante y contar con los elementos indispensables para su labor
La competencia del personal de microbiología, debe ser certificada por la revisión de su hoja de trabajo, la interpretación de muestras desconocidas, su habilidad técnica.
7.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
7.2 Periocidad del control:
El control de calidad del personal a cargo del procesamiento de las muestras microbiológicas se realizara trimestralmente.
7.3 Procedimientos y acciones correctivas ante desviaciones en el procesamiento y resultados del analisis evaluado
Se realizara el control de calidad del analista por duplicidad de muestra, esto será de forma trimestral, en el cual se le entregara al personal a cargo del procesamiento una cantidad determinada de cepas para su identificación y susceptibilidad.
El reporte del resultado será entregado a los 15 días después de habérsele entregada el panel de evaluación.
Dichas cepas habrán sido estudiadas e identificadas por el personal a cargo de control de calidad del área de microbiología.
Acciones Correctivas:
Competencia técnica:
A) La dirección del laboratorio debe asegurar la competencia del personal que participa en la realización del ensayo, opera equipos, evalúa los resultados y firma los informes de ensayos.
B) Cuando emplea personal en formación debe proveer adecuada supervisión.
C) La dirección debe autorizar al personal que realiza una determinada tarea; como ser realizar muestreo, el ensayo, emitir el informe, operar equipos, realizar interpretaciones.
D) La dirección debe definir los requisitos mínimos de nivel de estudio, calificación y experiencias necesarias para las personas que ocupan puesto de trabajo clave en el laboratorio (perfiles de puesto) y mantenerlos actualizados.
E) La competencia del personal debe ser evaluada en forma continúa por ejemplo a través de controles de calidad, ensayos intralaboratorios e interlaboratorios,
F) La formación a ser adquirida deberá orientarse a garantizar la competencia en las técnicas y métodos realizados por el personal involucrado en el ensayo.
Capacitación del personal:
1. El personal deberá contar con conocimientos, experiencia y competencia de acuerdo a la tarea y responsabilidades que tenga asignadas.
2. Todo el personal técnico debe recibir un adecuado entrenamiento que incluyen técnicas básicas de microbiología como la manipulación en condiciones de esterilidad y adecuado criterio para dicha disciplina.
7.4 Registro:
Anexo 7
8 CONSERVACION DE CEPAS DE TRABAJO:
La mayoría de los procedimientos en Microbiología Clínica, dependen de que los microorganismos viables en el cultivo sean capaces de mantener sus características morfológicas, fisiológicas y que sean típicas y reproducibles.
Para ayudar en este control, las Cepas Estándar de Control de Calidad, son un componente esencial de un proceso de validación.
Generalmente se utilizan cepas de referencia como las ATCC y si son cepas aisladas de pacientes, es necesario tener un registro de la bacteria que incluye nombre, lugar de aislamiento, reacciones bioquímicas y patrón de sensibilidad a los antibióticos, forma de almacenaje, fecha de último repique
En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos específicos:
· Características típicas.
· Características estables.
· Reproducibilidad
8.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
8.2 Periocidad del control:
El control de calidad de las cepas se realizara mensualmente
8.3 Procedimientos y acciones correctivas
Métodos de Conservación de Cepas Bacterianas:
8.3.1 Cultivo Stock
8.3.1.1 Ultracongelamieto:
Hacer una suspensión fuerte de la colonia pura en caldo TSB conteniendo 10 a 15% de glicerol o sustituto. Dispensar en pociones de 0.5 ml en pequeños tubos con rosca y coloque en lo profundo del congelador a -45°C..
8.3.2 Cultivos Semi stock:
8.3.2.1 Congelamiento en congelador convencional:
Los congeladores convencionales pueden mantener una temperatura entre-10 a –25°C. Los cultivos se preparan de la misma manera como en el caso de la ultracongelación y son colocados en el congelador. El método permite la sobrevivencia de bacterias y levaduras en algunos casos por años y en la mayoría de las veces por al menos de 6 a 12 meses.
8.3.2.2 Cultivo en CTA:
Se preparan tubos con rosca conteniendo Cisteína- Tripticasa y Soya agar. Inocular el cultivo puro y joven e incube por 18 a 24 horas para obtener un crecimiento moderado, afloje la tapa y mantenga a temperatura ambiente o preferiblemente en refrigeración, si es posible en la oscuridad.
Microorganismos menos delicados sobreviven bien por un año y los fastidiosos por 6 meses.
8.3.2.3 Bacterias delicadas :
Los cultivos de trabajo diario de organismos delicados como N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae, S. pneumoniae y algunos menos delicados como el S. pyogenes, son preparados a partir del stock e incubados por 24 horas en medios apropiados como agar chocolate en ambiente de CO2 , para luego ser colocados en refrigeración. Después de una serie de 6 transplantes consecutivos, se debe preparar otro cultivo para uso diario a partir de la cepa en stock.
8.3.2.4 Bacterias anaeróbicas:
Los cultivos para trabajo diario de la mayoría de las bacterias anaeróbicas, pueden ser mantenidos en medio de carne cocida o en Tioglicolato con 0.5% de carbonato de sodio adicionado después de esterilizar por autoclave.
Los cultivos se incuban por 24 a 48 horas y guardados a temperatura ambiente.
INDICADORES:
La evaluación de los resultados del control de calidad en sus diferentes aspectos se realizara mediante indicadores de estructura, proceso y resultado.
9.1 Indicador de estructura:
Numero de informes del programa de control de calidad durante el año evaluado:
· Meta: Se realizara 4 informes por año (informes trimestrales)
· Fuentes de verificación: Informes de control de calidad interno del laboratorio de microbiología presentados a la jefatura del laboratorio
9.2 Indicadores de proceso:
Numero de actividades del programa de control de calidad interno implementadas en el año.
· Meta: Ha implementado un mínimo de 3 actividades que incluyen el control de calidad de medios, tubos e identificación y susceptibilidad antimicrobiana
· Fuentes de verificación: Registros del control de calidad según actividad evaluada.
9.3 Indicadores de resultados:
% de concordancia en identificación:
· Meta: Mayor del 80% de concordancia en el primer año de implementado el programa de control de calidad interno.
· Fuente de verificación : Registro del control de calidad
% de concordancia en la interpretación de la susceptibilidad:
· Meta: Mayor del 80% de concordancia en el primer año de implementado el programa de control de calidad interno.
· Fuente de verificación : Registro del control de calidad
ANEXOS
Anexo 1
REGISTRO DE PREPARACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO
Y OTROS
FECHA DE PREPARACIÓN ......./......./…....
MEDIO PREPARADO
MATERIA PRIMA
MARCA
LOTE N°
GRS/L
CANTIDAD TOTAL
pH medio preparado
CANTIDAD:_____________________ml N° TUBOS:_____________________ N° PLACAS:_______________
ESTERILIZACIÓN
AUTOCLAVE: ___________libras presión/tiempo
CONTROL DE CALIDAD
FECHA DE CONTROL DE CALIDAD ....../..../......
pH
Aspecto
Consistencia
Volumen
Esterilidad (24)
Esterilidad (48)
CONTROL DE CRECIMIENTO
Cepa Control
Satisfactorio
Insatisfactorio
CONTROL DE HEMOLISIS
Cepa Control
Beta
Alfa
Negativa
CONTROL DE INHIBICION
Cepa Control
Satisfactorio
Insatisfactorio
LOTE ACEPTADO: ________________ LOTE RECHAZADO: _______________
OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________
FIRMA PERSONA RESPONSABLE:_____________________________________________________________
Anexo 2
REGISTRO DE PREPARACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO
EN TUBOS
FECHA DE PREPARACIÓN ......./......./…....
MEDIO PREPARADO
MATERIA PRIMA
MARCA
LOTE N°
GRS/L
CANTIDAD TOTAL
pH medio preparado :___________ pH medio preparado:________________
CANTIDAD:__________________ml CANTIDAD:__________________ml
N° TUBOS:___________________ N° TUBOS:___________________
ESTERILIZACIÓN
AUTOCLAVE: ___________libras presión/tiempo
CONTROL DE CALIDAD
FECHA DE CONTROL DE CALIDAD ....../..../......
MEDIO
pH
Aspecto
Consistencia
Volumen
Esterilidad (24)
Esterilidad (48)
CONTROL DE REACCION
Cepa Control
TSI
Reacción Esperada
LIA
Reacción Esperada
CITRATO
Reacción Esperada
Cepa Control
SIM
Reacción Esperada
BILIS ESCULINA
Reacción Esperada
Reacción Esperada
LOTE ACEPTADO: ________________ LOTE RECHAZADO: _______________
OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________
FIRMA PERSONA RESPONSABLE:_____________________________________________________________
Anexo 3
REGISTRO DE CONTROL DE CALIDAD EM IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS
CEPA N º...........
Institución:
Fecha de recepción de cepas: Fecha procesamiento:
1. IDENTIFICACION DE GENERO Y ESPECIE: PRUEBAS BIOQUIMICAS
PRUEBA
RESULTADO: +/-
PRUEBA
RESULTADO: +/-
2. RESULTADOS
IDENTIFICACION FINAL DE LA CEPA No.
GENERO ESPECIE
ANALISTA:…………………………………………
Anexo 4
REGISTRO DE CONTROL DE CALIDAD DE DISCOS DE SENSIBILIDAD
FECHA:
RESPONSABLE:
E. coli S. aureus P. aeruginosa E.coli E. faecalis
MARCA LOTE F/V ATCC 25922 ATTC 25923 ATCC 28573 ATCC 35218 ATCC 29212
mm C.C mm mm C.C mm mm C.C mm mm C.C mm mm C.C mm
Amikacina 30 ug
Amoxicilina/ac clavul 20/10ug
Ampicilina 10 ug
Ampicilina/sulbactan 10/10ug
Aztreonam 30 ug 28-36 - 23-29 -
Carbenicilina 100 ug 23-29 - 18-24 -
Cefaclor 30 ug 23-27 27-31 - -
Cefazolina 30 ug 21-27 29-35 - -
Cefepime 30 ug 31-37 23-29 24-30 -
Cefixime 5ug 23-27 - - -
Cefoperazona/sulbactam 28-34 24-33 23-29 -
Cefotaxima 30ug 29-35 25-31 18-22 -
Cefoxitin 30 ug 23-29 23-29 - -
Ceftazidime 30 ug 25-32 16-20 22-29 -
Ceftriaxona 30 ug 29-35 22-28 17-23 -
Cefuroxima 30 ug 20-26 27-35 - -
Cefalotina 30 ug 15-21 29-37 - -
Cloranfenicol 30 ug 21-27 19-26 - -
Ciprofloxacina 5 ug 30-40 22-30 25-33 -
Clindamicina 2 ug 24-30 - -
Colistina 10 ug 11.-17 11.-17
Doxiciclina 30 ug 18-24 23-29
Eritromicina 15 ug - 22-30 - -
Fosfomicina 200ug 22-30 25-33 - -
Gentamicina 10ug 19-26 19-27 16-21 -
Imipenem 10ug 26-32 - 20-28 -
Levofloxacina 5 ug 29-37 25-30 19-26 -
Linezolid 30ug - 25-32 - -
Lomefloxacina 10 ug 27-33 23-29 22-28 -
Meropenem 10 ug 28-34 29-37 27-33 -
Ac nalidixico 30ug 22-28 - - -
Nitrofurantoina 300 20-25 18-22 - -
Norfloxacina 10 ug 28-35 17-28 22-29 -
Oxacilina 1ug - 18-24 - -
Penicilina 10 U - 26-37 - -
Polymyxin B 300 U 13-19 - 14-18
Rifampicina 5 ug 8-1O 26-34 - -
Sulfisoxazole 250ug o 300ug 15-23 24-34 - -
Teicoplanina 30 ug - 15-21 - -
Tetraciclina 30ug 18-25 24-30 - -
Ticarcilina 75 ug 24-30 - 21-27 6
Trimet/sulfamet 1.25/23.75ug 23-29 24-32 - - >=20 *
Vancomicina 30ug - 17-21 - -
Gentamicina (100 ug) - - - - 16-23
Estreptomicina (300 ug) - - - - 14 -20
Estreptomicina (10 ug) 12-20 14-22 -
Claritromicina 15 ug - 26-32 -
Ofloxacina 5 ug 29-33 24-28 17-21
Cefoperazona 30 ug 28-34 34-33 23-29
Meticilina 10 ug - 17-22 -
Mezlocilina 75 ug 23-29 - 19-25
Anexo 5
REGISTRO DE PREPARACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE COLORANTES
FECHA DE PREPARACIÓN ......./......./…....
COLORANTE PREPARADO
MATERIA PRIMA
MARCA
LOTE N°
GRS/L
CANTIDAD TOTAL
CANTIDAD:_____________________ml
CONTROL DE CALIDAD
FECHA DE CONTROL DE CALIDAD ....../..../......
Lamina Control
Gram
Resultado Esperado
LAMINA 1
LAMINA 2
LAMINA 3
LAMINA 4
Lamina Control
Ziehl Neelsen
Resultado Esperado
LAMINA 5
LAMINA 6
LAMINA 7
LAMINA 8
ANEXO 6
FORMATO
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
REGISTRO DE TEMPERATURA
Edición:
Pág. 1 de 1
EQUIPO
CODIGO
RANGO
AÑO
ESTUFA HERAEUS
35 A 37 ° C
2007
FECHA
INSTRUMENTO
(NTERNO-EXTERNO (CODIGO)
T° 1
T°2
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
FORMATO
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
REGISTRO DE TEMPERATURA
Edición:
Pág. 1 de 1
EQUIPO
CODIGO
RANGO
AÑO
REGRIGERADORA COLDEX
2-8 ° C
2007
FECHA
INSTRUMENTO
(NTERNO-EXTERNO (CODIGO)
T° 1
T°2
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
USO DE AUTOCLAVE
ESTERILIZA S.A.
Edición:
Pág. 1 de 1
UBICACION
CODIGO
MES
AMB. ALTO RIESGO
FECHA
INICIO
TEMP
PRESIÓN
FIN
TOTAL
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
--------------------- -----------------------
Responsable Jefe de Área
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
USO DE BALANZA ANALÍTICA OHAUS
Edición:1
Pág. 1 de 1
UBICACION
CODIGO
MES
FECHA
INICIO
FIN
TOTAL
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
LABORATORIO DE REFERENCIA REGIONAL DISA III LIMA NORTE
REGT N°
USO DE CENTRÍFUGA MARATHÓN 21000
Edición:
Pág. 1 de 1
UBICACION
CODIGO
MES
FECHA
INICIO
FIN
TOTAL
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
USO DEREGISTRO DEL HORNO
Edición: 1
Pág. 1 de 1
UBICACION
MES
FECHA
1ra LECT. Tº
2da. LECT. Tº
TIEMPO DE ESTERILIZACIÓN (45 MINUTOS APROX.)
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
HORA INICIO
HORA DE TÉRMINO
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
-------------------- ------------------
Responsable Jefe de Área
Anexo 7
Acción Correctiva
Nº Correlativo
Acta Comité de Calidad Nº
Fecha
Referencia
Causa
Acción de Mejoramiento
Implementación
Fecha
Responsable
(Nombre/Cargo/Firma)
Seguimiento / Cierre de la acción correctiva
Seguimiento de la acción correctiva
Fecha de seguimiento
Implantación
Nombre / Cargo / Firma
SI
NO
Comprobación de la eficacia de la acción de mejoramiento
Fecha de cierre
Fecha comprobación de eficacia
Grado de eficacia
Nombre y Firma
Encargado de calidad
El laboratorio clínico de microbiología, requiere para su correcto funcionamiento un adecuado y constante control de calidad sobre todas las etapas en el recibo, manejo y reporte de especimenes clínicos. En general este control debe identificar, monitorear, evaluar y aprobar metodologías relativas al cuidado del paciente.
En este contexto el control de calidad en Microbiología Clínica envuelve el monitoreo de los medios de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para asegurar una adecuada práctica en el aislamiento, identificación y caracterización de agentes etiológicos y su correspondiente prueba de susceptibilidad como una guía de la terapia.
Un programa de control de calidad debe incluir además un Manual de Procedimientos, validación de metodologías y equipos, el desarrollo de ciclos de educación continua, elementos de bioseguridad y una supervisión sobre los reportes generados.
En éste sentido se hace énfasis en la correcta valoración de las pruebas de laboratorio, los agentes causales de enfermedades, el conocimiento de la flora normal, la taxonomía bacteriana y la interpretación correcta de las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos.
El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo, que el producto final del trabajo tenga un grado aceptable de confiabilidad con los límites establecidos. Debido a que la mayoría de los resultados en microbiología son producto de interpretaciones y evaluación de reacciones bioquímicas de seres vivos, donde la capacidad y experiencia del evaluador tienen un gran valor, los cálculos de coeficientes de variación y desviaciones estándares que son parte de funciones analíticas, tienen poca aplicación en el laboratorio de microbiología.
II. JUSTIFICACIÓN
La calidad debe ser la guía en el que hacer diario de un laboratorio, porque asegura que los resultados generados sean confiables, reconocidos y aceptados. Es responsabilidad de la dirección del laboratorio establecer los mecanismos rutinarios de control de calidad y definir su frecuencia.
Existen dos tipos de control: un control interno llevado a cabo por el propio personal de laboratorio y un control externo donde la participación corresponde a personal ajeno al propio laboratorio.
Este último se hace utilizando materiales de referencia, que son enviados a los laboratorios que participan en la red de control de calidad.
La calidad del resultado depende, de un conjunto de factores que el laboratorio debe tratar de controlar, sin tener a veces, la posibilidad de intervención directa en algunos de esos factores tales como:
La justificación de la toma de una muestra.
La utilización de la técnica y del material apropiado para la toma de la muestra.
Las condiciones apropiadas para el transporte o el envío de la muestra (medios de transporte, temperatura, condiciones de espera).
La técnica apropiada para la siembra de la muestra (medios de cultivo, temperatura, factores de crecimiento, etc.).
La calidad de los medios utilizados, para que los resultados sean reproducibles.
Las pruebas de identificación idóneas, con buena sensibilidad (el uso rutinario de cepas de referencia).
La correcta interpretación de los resultados y su reporte adecuado por parte del personal.
La interpretación correcta de los resultados por parte del médico.
Para que los resultados obtenidos posean una buena calidad diagnóstica, deben contener los siguientes criterios:
Fiabilidad o exactitud lo cual se traduce en un resultado correcto. Para ello existen dos tipos de pruebas:
Pruebas cuantitativas: Se miden por el grado en que los resultados se acercan al valor verdadero. Ejemplo: Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de los antibióticos “in vitro”.
Pruebas cualitativas: La exactitud se mide determinando si el resultado es correcto. Ejemplo: Identificación de agentes patógenos.
Reproducibilidad o precisión: Cuando se repite la prueba, se obtiene el mismo resultado. En pruebas microbiológicas, esto se dificulta por la falta de homogeneidad y estabilidad en una muestra clínica
Rapidez y eficiencia: capacidad de entregar rápidamente los resultados fidedignos.
La calidad de los resultados es afectada por los siguientes factores:
La capacitación del personal profesional.
La calidad de los materiales y equipos: dotación suficiente, preparación y mantenimiento apropiados.
El cumplimiento de las normas de bioseguridad
La transmisión oportuna de los resultados: boletas correctamente completadas, datos transcritos de manera legible.
III. OBJETIVOS
Implementar un programa de control interno de la calidad en el Laboratorio de Referencia Regional en Salud Publica de la DIRESA Lima.
Lograr una estandarización de los métodos y materiales empleados para el procesamiento de una muestra microbiológica.
IV. RESPONSABLES
Jefe o coordinación del servicio de microbiología ( Unidad, area )
Coordinación de control de calidad del servicio de microbiología
V. ACTIVIDADES
1. Control de calidad de medios de cultivo
Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos y la absorción de agua del exterior, así como la formación de agua dentro de la botella como consecuencia de las fluctuaciones de temperatura en el ambiente, favorece el crecimiento bacteriano. Esto puede conducir al consumo de nutrientes, variaciones de Ph y cambios en el color del medio.
Además la exposición a la luz puede llevar a importantes alteraciones en los constituyentes del medio de cultivo.
Teniendo en cuenta los factores antes señalados, los medios de cultivo deshidratados deben almacenarse siempre en lugares frescos, a temperatura ambiente y protegidos contra la humedad y la luz.
Los medios elaborados en polvo tienen una vida útil de al menos 3 años. El material que ha sufrido cambios substanciales, tales como hidratación, endurecimiento y cambio de color, deben descartarse.
Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo deshidratado, con el nombre del producto, nombre de la casa proveedora, número de control del frasco, fecha de expiración, número de lote y fecha en que se abrió el frasco.
El grado de disolución de un medio deshidratado, así como la eficacia del mismo ya preparado, depende en gran medida del procedimiento empleado en la rehidratación.
Se recomienda utilizar agua recién destilada o completamente desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble del medio que se quiere preparar. Si el medio va a distribuirse en tubos, debe agitarse constantemente para asegurar una adecuada homogenización al momento de servirlos.
Cuando se va a esterilizar el medio de cultivo, debe asegurarse en seguir las instrucciones de tiempo, presión y temperatura para la obtención de medios de cultivo óptimos. Una temperatura de 121 °C , presión de 15 libras y un tiempo de esterilización de 15 minutos, son suficientes para la mayoría de los medios.
El medio esterilizado debe ser enfriado a 45°-60°C en un baño maría, para
evitar la formación de agua de condensación.
Al ser vertidos en las placas Petri, evitar la formación de burbujas y coágulos.
Durante el proceso de servida, debe tomarse una muestra del medio para realizar el control de calidad por esterilidad y eficiencia.
El medio de cultivo reconstituido tiene una vida útil limitada. Si no se emplea de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para garantizar su utilidad durante un periodo de tiempo.
El almacenamiento a 4°C es el mejor para la mayoría de los medios, sin embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a temperatura ambiente.
Los medios deben mantenerse preferiblemente en sitios oscuros, ya que la luz puede afectar algunos de sus componentes. Para evitar la desecación se aconseja que se guarden en bolsas plásticas bien cerradas. Las placas Petri almacenados así, deben mantenerse con el fondo hacia arriba.
Dado que los medios almacenados en refrigeración, cuando pasan a temperatura ambiente tienden a formar agua de condensación en la superficie, se recomienda poner las placas Petri en la incubadora a 35°C por 2 horas, colocándolos con el fondo hacia arriba para obtener una superficie seca.
Esto es particularmente importante para que el agua no afecte la individualidad de las colonias en el aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los que el exceso de agua puede afectar la dilución de las colonias y por ende la lectura del halo de inhibición.
Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso rutinario, por eficiencia o calidad, mediante la inoculación de microorganismos cuyo comportamiento conocemos, tanto para reacciones positivas como negativas.
Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domésticas o cepas control comerciales (ATCC).
Se debe guardar un libro de registro de los resultados obtenidos.
1.1 Control de esterilidad
Se controlara el 5 -10 % del lote de medios preparados a 35ºC por 48 horas, si el porcentaje de placas contaminadas es mayos al 10% se descartara el lote completo
1.2 Controles de eficacia
Controlar el crecimiento de las bacterias a evaluar y que muestre resultados aceptables en pruebas de sensibilidad, se utilizaran cepas ATCC
1.3 Control de pH:
Se controlara el pH del medio en cada lote de preparación, teniendo como rango de 7.2 a 7.4 despues de gelificar a temperatura ambiente
1.4 Profundidad del agar
El estandar es de 4 mm
Se utilizara un vernier o una aguja con la marca de la medida y probar en cuatro cuadrantes y el centro de la placa
· 60 – 70 ml de agar para placa de 150 mm
· 25 – 35 ml de agar para placas de 100 mm
1.5 Contenido de timidita
La excesiva cantidad de timidita puede revertir los efectos inhibitorios de las sulfonamidas y trimpetoprim.
Se debe de evaluar cada lote de Mueller Hinton utilizando una cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212 o alternativamente Enterococcus faecalis ATCC 33186 confrontada con el disco de sulfatrimetropim de 25 ug el halo de inhibición debe ser mayos a 20mm
1.6 Contenido de calcio, magnesio
Estándar: calcio ++ :20 – 25 mg/L
Magnesio ++ :10 – 12.5 mg/L
Concentraciones mayores a estos afectaran:
· Colistin y tetraciclinas: Aumentaran su actividad
· Aminoglucosidos: Disminuyen su actividad
Exceso de Zinc afecta a:
· Carbapenem el cual disminuye su actividad
Cepa control:
· Pseudomona aeruginosa ATCC 27853 se enfrentara con disco de gentamicina de 10ug, el halo de inhibición debe ser de 16 a 21 mm
1.7 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
1.8 Periocidad del control:
Cada vez que se prepare un lote de medios de Cultivo.
1.9 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la calidad de los medios
1.9.1 Contaminación de las placas de cultivo:
· Realizar descontaminación del área de trabajo
· Realizar el control de contaminación de la incubadora, tal como se describe en el manual de microbiología del Laboratorio de Referencia Regional de la DIRESA LIMA
· Verificar el buen uso del autoclave
1.9.2 Acción correctiva en relación al pH:
· Si el pH del medio de cultivo no esta en el rango requerido, debe ser ajustado dependiendo del caso con soluciones estériles de ClNa 0,1normal ò HCl 0,1 normal
· Medir el Ph por encima de los 25°C.
· Sobrecalentamiento en la esterilización, vuelta a fundir o calentamiento prolongado a 50°C.
· Solución incompleta del medio.
· Mala calidad del agua.
· Recipiente mal lavado o con residuos químicos.
· Mala conservación del medio deshidratado o vencido
1.9.3 Contenido de timidita
Si existe concentraciones elevadas de timidita se deberá corregir añadiendo plasma de caballo al 3%, esto eliminara el excedente ya que el plasma contiene timidita fosforilada
1.9.4 Contenido de calcio y magnesio
Se deberá de verificar la cantidad de cationes divalentes en el inserto del frasco muy independiente de la verificación práctica, en el caso que exceda la cantidad máxima permitida se deberá de rechazar el frasco de medio de cultivo.
1.9.5 Turbidez o precipitación :
· Mala calidad del agua.
· Sobrecalentamiento.
· Ph incorrecto.
· Solución incompleta.
1.9.6 Oscurecimiento :
· Sobrecalentamiento.
· Solución incompleta.
· Alteración del Ph.
1.9.7 Gel blando :
· Bajo porcentaje de agar en el medio.
· Errores en la pesada del medio deshidratado o en los suplementos.
· Sobrecalentamiento.
· Mala homogenización del medio.
· Exceso de agua.
1.9.8 Crecimiento bacteriano pobre :
· Exceso de calentamiento.
· Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.
· Alteración en el Ph.
1.10 Registro:
Anexo 1
2. Control de calidad de tubos con medios bioquímicos
El control de calidad de los tubos Bioquímicas se deberá realizar usando cepas ATCC, esperando obtener los resultados que se observan en la tabla:
TSI E. coli ácido/ácido
TSI Shigella flexnerii alcalino/ácido
TSI Pseudomona aeruginosa alcalino/alcalino
SIM Proteus mirabilis movilidad positiva
SIM K. pneumoniae movilidad negativa
Citrato K.pneumoniae color azul. Crece
Citrato de Simmons E. coli Color verde no crece.
Caldo de urea Proteus Rojo-Morado. Positivo.
Caldo de urea E. coli Color Naranja. Negativo.
2.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
2.2 Periocidad del control:
Cada vez que se prepare un lote de medios de Cultivo.
2.3 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la calidad de los medios bioquímicas.
2.3.1 Contaminación de las tubos de cultivo:
· Realizar descontaminación del área de trabajo
· Realizar el control de contaminación de la incubadora, tal como se describe en el manual de microbiología del Laboratorio de Referencia Regional de la DIRESA LIMA
· Verificar la esterilización de los tubos colocando un papel indicador en cada esterilización del material
2.3.2 Acción correctiva en relación al pH:
· Si el pH del medio de cultivo no esta en el rango requerido, debe ser ajustado dependiendo del caso con soluciones estériles de ClNa 0,1normal ò HCl 0,1 normal
2.3.3 Calidad del medio
· Verificar la profundidad de los tubo el cual debe de tener 3.5 cm y la cuña de 2.5 cm de largo
· Medios que no estén fuera de la fecha de vencimiento
2.4 REGISTRO
ANEXO 2
3. CONTROL DE CALIDAD DE IDENTIFICACION
3.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
3.1 Periocidad del control:
El control de calidad de la identificación microbiológica se realizara bimestralmente, en el cual estará comprendida la identificación de especie, género y reacciones bioquímicas.
3.2 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la identificación
3.2.1 Reacción Bioquímica inadecuada:
· Verificar la reacción del control de calidad de los medios en tubo
3.2.2 Problemas con las cepas a estudiar
· Verificar que las cepas estén controladas y no estén muy deterioradas (envejecidas)
3.2.3 Control de calidad de pureza y viabilidad:
Este control se realizara a diferentes niveles del proceso; a simismo, se desempeñara cada vez que se realice un replique. con el fin asegurarse que las cepas conservan su viabilidad y sus caracteres bioquímicos.
3.3 REGISTRO
ANEXO 3
CONTROL DE CALIDAD DE ANTIBIOGRAMA
4.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
4.2 Periocidad del control:
El control de calidad de la susceptibilidad antimicrobiana se realizara diariamente por 30 días, en el cual se verificara que los diámetros obtenidos no estén fuera de los diámetros permitidos.
4.3 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la susceptibilidad
Procedimientos:
4.3.1 Control Diario:
Para cada combinación bacteria/antimicrobiano solo uno de cada 20 ensayos consecutivos puede estar fuera de los limites permitidos, caso contrario se requiere acciones correctivas
4.3.2 Control semanal:
· Primero se deberá demostrar una eficiencia satisfactoria para las pruebas diarias
· Para pasar del control diario al semanal, no mas de tres de cada 30 diametros de inhibición obtenidos diariamente puede estar fuera de los limites aceptables para cada combinación bacteria/antimicrobiano
· Continuar con el control de calidad u a vez por semana y cada vez que se cambie algún reactivo .
PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD DIARIO
PRUEBA DIARIA
1/20 Fuera Del Rango aceptable
Acciones correctivas
Repetir la prueba el mismo día
Continuar con las pruebas diarias
Razón: Error obvio
Resultados dentro del rango: continuar con las pruebas diarias
Acciones correctivas inmediatas
Repetir la prueba el mismo día por 5 días consecutivo
Resultados dentro del rango aceptable
Acciones correctivas adicionales
Investigar posible fuente del error
Continuar con las pruebas diarias
SI
NO
SI
NO
SI
NO
PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD SEMANAL
Prueba Durante 30 Días Consecutivos
Razón: Error Obvio
Acciones correctivas adicionales
Repetir la prueba el mismo día
Continuar con las pruebas semanales
Al menos 1 de las pruebas semanales fuera del rango
Acciones correctivas
Repetir la prueba el mismo día por 5 días consecutivo
Acciones correctivas inmediatas
Investigar posible fuente del error
SI
NO
SI
NO
SI
NO
<=3/30 Resultados: fuera del rango aceptable Implementar controles semanales Resultado dentro el rango Continuar con las pruebas semanales Todos los resultados dentro del rango aceptable Continuar con las pruebas semanales NO NO SI SI 4.3.3 Halos de inhibición fuera del rango permitido · Verificar la fecha de vencimiento de los discos. · Verificar la temperatura de almacenaje de los antimicrobianos. · Los discos deben ser almacenados a un temperatura entre –20 y +8°C. · Algunos discos, especialmente los de antibióticos ß-lactámicos deben guardarse congelados a -20°C. Solo los viales en uso deben mantenerse a temperatura de refrigeración · Profundidad del Agar mayor a 4 mm · Concentración del inoculo superior al 0.5 de Mc farland · Al sacarlos de la refrigeradora para su uso, espere a que los viales alcancen la temperatura ambiente por 1 a 2 horas. · Siempre utilice primero los viales con fecha de caducidad más próxima. · Siempre que un cartucho a sido extraido del paquete, éste debe guardarse en un desecador que cierre perfectamente. · Cuando se utilice el aparato dispensador que contiene los discos deberá mantenerse siempre refrigerado. · Los discos son colocados en el medio a una distancia de más de 24 mm del centro de uno al centro del otro. En todo caso no colocar más de 12 discos en una placa de 150 mm, ni más de 5 discos sobre la placa de 100 mm. · Procurar no colocar discos de antibióticos bactericidas ( Ej. Penicilina, Cefalosporinas, Aminoglicósidos, Vancomicina ) al lado de antibióticos bacteriostáticos ( Ej. Cloranfenicol, Tetraciclina, Sulfonamidas ) para evitar el antagonismo antibiótico. · Colocar las placas en la incubadora dentro de los 15 primeros minutos después de su aplicación. · Para verificar el estado de los discos de sensibilidad, utilice cepas control ATCC, las cuales son seleccionadas por su estabilidad genética y por su utilidad en el método utilizado. Estas cepas se corren como una muestra más y se correlaciona el tamaño de los halos de inhibición con las medidas expresadas en los Manuales NCCLS M2-A6.
4.3.4 Halos de inhibición que presentan resistencia
· Verificar si la cepa estudiada presenta enzimas de resistencia a antibióticos ya sea betalactamicos, carbapenemasas, u otras resistencias
4.3.5 Problemas con las cepas a estudiar
· Verificar que las cepas estén controladas y no estén muy deterioradas (envejecidas)
· Verificar la reacción del control de calidad de los medios en tubo
· Verificar que las cepas estén controladas y no estén deterioradas (envejecidas)
4.3.6 El Estandar Mc farland:
· La densidad de la turbidez del Estándar McFarland deberá ser verificada utilizando un espectrofotómetro con dirección de luz de 1 cm y cubetas adecuadas para determinar absorbancia.
· Para realizar el control de un estándar McFarland de 0.5 , la absorbancia deberá leer entre 0.08 a 0.10 a una longitud de onda de 625 nm.
· Antes de ser usados, los patrones deberán agitarse para una adecuada homogenización.
· Mensualmente los patrones son descartados y vueltos a preparar, o en su defecto se debe comprobar su densidad.
4.3.7 Habituales causas de error en la prueba de susceptibilidad:
· Error administrativo en la transcripción de los datos del control de calidad.
· Lectura errónea al medir el diámetro de la zona.
· Contaminación u otros cambios en la cepa control.
· Suspensión del inóculo demasiado fuerte o demasiado débil.
· Mala agitación del estándar McFarland o estándar dañado.
· Incorrecta temperatura, tiempo o atmósfera de incubación.
· Perdida de la potencia del disco durante su transporte, su manejo o su almacenaje en el laboratorio.
4.3.8 Control de calidad de la lectura e interpretación:
· Cuando se va a determinar la sensibilidad del S. Pneumoniae a la Penicilina, utilizar un disco de Oxacilina de 1 µg.
· Las cepas de S. Pneumoniae con zonas de Oxacilina de >/- a 20 mm son susceptibles a penicilina ( CIM desarrollo de poca afinidad de las proteínas fijadoras de penicilina (PBP’s) o a la producción de betalactamasa. Las pruebas de difusión en disco pueden detectar con exactitud los aislamientos que poseen alteradas las PBP’s , pero no detectarán con fiabilidad las cepas productoras de betalactamasa. Estas últimas han de detectarse con pruebas directas de betalactamasa ( Ej. Cefinasa ).
· Las placas han de leerse con luz transmitida para visualizar cualquiera pequeña colonia dentro del halo, que haría la cepa resistente.
· Todo caso de Estafilococo resistente a la Vancomicina, debe ser
· confirmado, enviado a un laboratorio de referencia e informar a las Autoridades de Salud Pública.
· Si se observan colonias dentro de un halo de inhibición, deberá confirmarse la pureza de la cepa y repetir la prueba.
· La difusión (" swarming ") de los Proteus sp no es inhibida por todos los antibióticos, por lo que no se toma en cuenta.
· Ocasionalmente se pueden observar varias colonias esparcidas por una zona de inhibición. Este fenómeno es constante para la Serratia sp las colonias se considerarán significativas y la cepa resistente
· Solo es necesario probar una Tetraciclina y sus resultados son equivalentes a la Tetraciclina, Minociclina, Doxiciclina.
· Los resultados obtenidos con al Polimixina, pueden aplicarse a la Colimicina. Su halo es pequeño debido a su pobre difusión en agar.
· Los Estafilococos resistentes a la Meticilina, Oxacilina o Nafcilina, también puede ser informados como resistentes a la Penicilina, Cefalosporinas , carbapenem y la Cefalotina puede utilizarse para representar Cefalotina, Cefradina Cefaclor y Cefadroxil
· Los datos de sensibilidad al ácido nalidíxico, Nitrofurantoina, Norfloxacina, Sulfonamidas y Trimethoprim, se aplican solamente a cepas aisladas de infecciones urinarias.
· En cepas de Salmonella y Shigella, solo Ampicilina, una Quinolona y Trimethoprim/sulfametoxazol deben ser probados e informados de rutina en heces. Además el Cloranfenicol y una cefalosporina de tercera generación deben ser probados e informados en cepas de Salmonella sp extraintestinal.
· En cepas de Salmonella sp y Shigella sp, los aminoglicósidos y las cefalosporinas de primera y segunda generación, pueden aparecer como activos in vitro pero no son efectivos clínicamente y no deben ser informados como susceptibles.
· La prueba de la betalactamasa predice la resistencia a la Penicilina, Ampicilina y Amoxicilina.
· En los Enterococos sp las cefalosporinas, los aminoglicósido ( Excepto por resistencia de nivel alto ) trimetropim / sulfametoxazole a clindamicina pueden aparecer activos in vitro pero no son efectivos clínicamente y éstas cepas no deben informarse como susceptibles.
4.4 Registro:
ANEXO 4
CONTROL DE CALIDAD DE LA TINCIÓN
5.1 Procedimiento de control:
Se preparan portas de microscopio con una gota de una suspensión que contenga organismos Gram positivos y Gram negativos mezclados en diferentes proporciones.
Una vez seco, estas portas de microscopio pueden almacenarse para su empleo posterior como controles de la tinción Gram.
TINCION MICROORGANISMO REACCION ESPERADA
· Gram --- Estafilococo sp --- Morado--- Gram-Positivo.
· Gram --- E. coli --- Rosado--- Gram-Negativo.
· Gram --- Mezcla de ambos--- Mezcla de ambas colores.
· Zielh-Neelsen --- Mycobacterium sp --- Rosadas. ---BAAR positivo
· Zielh-Neelsen --- E. coli --- Azul. --- BAAR negativas.
· Verde malaquita --- Clostridium sp --- Espora de color verde.
· Verde malaquita --- E. coli --- Célula completa rosada.
5.2 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
5.3 Periocidad del control:
El control de calidad de los colorantes en microbiologia se realizara semanalmente, en la cual esta incluido la coloración Gram, coloración Giemsa, coloración Ziehl neelsen y otras coloraciones .
5.4 Procedimientos y acciones correctivas ante dificultades con la calidad de la tinción.
· El Violeta Cristal tiende a hacer precipitación, lo cual puede ser causa de observación de estructuras ficticias en el frotis. Si se observa precipitación, proceda a filtrar el tinte.
· La evaporación puede ser causa de mal funcionamiento de los tintes.
· Las placas que no han sido previamente limpiadas o con restos de grasa, pueden ser causa de mala fijación y tinción de la muestra.
· Sobrecalentamiento de la placa durante la fijación. El exceso de calor provoca un daño físico en la pared celular de las bacterias que puede afectar la retención de los colorantes.
· Lavado muy fuerte de la placa durante la tinción.
· Proporción no adecuada de los componentes de la tinción.
· Algunos tintes como Safranina y Fucsina básica pueden contaminarse. Si se sospecha esto , cultive 1 ml en Tioglicolato, o descarte el tinte.
· La tinción de Zielh-Neelsen tiene sus limitaciones en cuanto a no ser específica para micobacterias y su baja sensibilidad, ya que el nivel de detección es de 5,000 a 10,000 bacilos por mililitro de esputo. Esto debe ser tenido en cuenta al evaluar una placa.
· Una Cepa Control positiva, debe ser teñida cada vez que un nuevo lote de tintes para Zielh-Neelsen es preparado y cuando se reciba un nuevo pedido de tintes y reactivos. Se puede utilizar la cepa de Mycobacterium tuberculosis ATCC 25177 como control positivo.
5.5 Registro
Anexo 5
CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS DE LABORATORIO
Todos los instrumentos utilizados en el laboratorio clínico, deben estar amparados por un programa de control de calidad y de mantenimiento preventivo, basados en las instrucciones del fabricante y los procedimientos establecidos.
Un programa de mantenimiento preventivo es esencial para asegurar la exactitud y longevidad del instrumento. El chequeo periódico recomendado es importante para minimizar el daño o la necesidad de servicio y reparación. El jefe de laboratorio es responsable por el programa general, recayendo en el encargado de la sección la responsabilidad primaria en su área de trabajo.
6.1 Manual Estándar de Procedimientos Operacionales:
El Manual Estándar de Procedimientos Operacionales debe ser organizado por grupo de equipos.
Un listado de los equipos debe incluir: nombre, marca, modelo, número de serie, fecha de recibo y número de inventario de la institución.
El Manual debe incluir el récord de mantenimiento preventivo, periodicidad de la inspección y fallas del instrumento y debe estar accesible en todo momento.
6.2 Validación de Equipos:
Los nuevos equipos requieren estudios de validación para determinar que su funcionamiento es al menos comparables a los equipos existentes o a métodos de referencia. Estos equipos son aceptados solo si logran cumplir las metas mínimas de funcionabilidad y eficiencia al compararse con los existentes.
Este récord de validación debe mantenerse por toda la vida útil del equipo.
6.3 Manual de Instrucciones del Uso del Instrumento:
Estos Manuales deben estar incluidos en el Manual de Operaciones del instrumento, redactados en forma clara, en el idioma de los usuarios, inclusive la documentación del entrenamiento del personal.
Cada protocolo debe incluir precauciones de seguridad y los procedimientos de limpieza y cuidado del instrumento. Los Manuales deben incluir instrucciones básicas para resolver problemas menores y un récord de incidencias, que incluye el tipo de problema, los pasos tomados para resolverlo y la acción correctiva para evitarlo en el futuro.
6.4 Calibración del Instrumento:
Los equipos que requieren un exacto nivel de precisión para obtener un resultado seguro, requieren de una calibración periódica. La fecha de la calibración, frecuencia y resultado, deben ser mantenidos en un libro récord dentro del laboratorio.
6.5 Control de Calidad:
Todo equipo debe ser evaluado por un programa de Control de Calidad en base a las instrucciones del proveedor y las regulaciones internas del laboratorio. Debe mantenerse un libro récord de todo lo realizado al respecto, con el nombre del instrumento, fecha, resultado y comentarios. En otro capítulo se afianzarán los conceptos sobre éste tema.
6.6 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
6.7 Periocidad del control:
El control de calidad de los equipos de laboratorio se realizara de acuerdo a las especificaciones del fabricante, según se detallara a continuación .
6.8 Procedimientos y acciones correctivas
6.8.1 INCUBADORAS:
· Se controlara diariamente la temperatura de las incubadoras, antes de sacar las placas y se anotara en una hoja control el resultado.
· Coloque las muestras, placas y tubos, en una posición segura.
· Un papel de filtro humedecido con agua en el fondo de la incubadora, es adecuado para mantener la humedad requerida.
· El encargado de sección debe ser notificado cuando una incubadora falla en mantener el rango de temperatura aceptable.
· Observe macroscópicamente las placas Petri para observar desecación.
· Todas las incubadoras deben ser limpiadas mensualmente y llevar un récord de mantenimiento preventivo.
6.8.2 AUTOCLAVES:
Frecuencia: Semanal
· Examine récord de Temperatura y Presión
· Utilice Indicadores de Esterilización
· Récord de uso, fecha, temperaturas, presión
· Chequeo del nivel de agua
· Uso de Indicadores biológicos de Esterilidad
· Chequeo de la válvula de seguridad
· Limpieza del Interior y Exterior.
· Limpieza de la Pantalla de Temperatura
· Limpieza del drenaje y sellos
6.8.3 REFRIGERADORAS:
Frecuencia: Diaria
· Coloque las placas Petri en posición invertida con la tapa hacia abajo.
· Mantenga la temperatura entre 4 – 8 ° C.
· Utilice refrigeradoras que no hacen escarcha.
· No coloque medios de cultivo aún ligeramente calientes dentro de la refrigeradora.
· Evite abrir con frecuencia la puerta de la refrigeradora.
· Lleve un registro de problemas de funcionamiento, causa y solución.
· No guarde alimentos en refrigeradoras para especímenes clínicos.
6.8.4 MICROSCOPIOS:
Cuidados y mantenimiento Diario Mensual Semestral
· Limpieza del aceite de objetivos, condensador, etc
· Apagar la fuente de luz
· Colocar cobertor contra el polvo
· Limpieza de Ocular, condensador, diafragma con líquido de limpieza de lentes
· Limpieza y ajuste del sistema óptico
· Limpieza y ajuste del sistema lumínico
· Limpieza y lubricación del sistema mecánico
6.8.5 CENTRÍFUGAS:
Frecuencia: Mensual
· Verificar tubos con rajaduras
· Verificar por restos de vidrio o líquido dentro del portatubo o las copas
· Verificar por balance de cada lote
· Verificar por la temperatura de funcionamiento ( Refrigeradas )
· Limpieza de cualquier derrame
· Limpieza de la olla del rotor
· Limpieza externa
· Desinfección de la olla del rotor
· Verificación de brochas
· Chequeo del circuito eléctrico
· Certificación del velocímetro
Problemas y Limitaciones:
Vibración
· Chequear por balance apropiado.
· Chequear tamaño de los tubos.
· Mirar si la centrífuga está sobre una superficie plana.
Rotura
· Chequear tamaño de los tubos.
· Balance correcto.
· Verificar el interior de los portatubos
Desprendimiento de tapas:
· Utilice tapas de rosca.
· Si no es posible, use Parafilm sobre los tapones de caucho.
· Siempre que sea posible utilice tubos de plástico.
6.8.6 ANALIZADOR DE PH:
Frecuencia: Diaria
Los analizadores de pH normalmente deben ser calibrados antes de ser utilizados, a fin de garantizar la calidad y exactitud de las lecturas. Los procedimientos que se realizan son los siguientes:
· Calibración de un punto. Se realiza en condiciones de funcionamiento y uso normal, Utiliza una solución de referencia de pH conocido.
· Calibración de dos puntos. Se realiza si se requiere efectuar mediciones muy precisas, utiliza dos soluciones de referencia de pH conocido, Igualmente, si el instrumento se utiliza de forma esporádica y si el mantenimiento que recibe es eventual.
Descripción del proceso
Tabla de solución de problemas:
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
SOLUCION
El analizador de pH presenta lecturas Inestables.
Burbujas de aire en el electrodo.
Remojar el electrodo para eliminar las burbujas.
Electrodo sucio.
Limpiar el electrodo y recalibrar.
Electrodo muy superficial.
Verificar que la muestra cubre perfectamentela punta del electrodo.
Electrodo roto.
Reemplazar el electrodo.
La respuesta del electrodo es lenta.
Electrodo sucio o grasoso
Limpiar el electrodo y recalibrar.
La pantalla presenta mensaje de error.
Operación incorrecta o selección errónea del modo de operación.
Verificar modo de operación seleccionado. Seleccionar una operación válida.
La pantalla presenta mensaje de calibración o error.
Error de calibración.
Recalibrar analizador de pH.
Valor de buffer erróneo en la calibración.
Verificar los valores del buffer utilizado.
Electrodo sucio.
Limpiar electrodo y calibrar.
6.8.7 BALANZA ELECTRONICA DIGITAL:
Frecuencia: Anual
Acción:
· Calibrar la balanza y documentar el proceso.
· Desensamblar y limpiar los componentes internos.
· Se debe seguir el proceso definido por el fabricante, o contratarse una firma especializada para el efecto.
Tabla de solución de problemas:
Problema
Causa del problema
Solución
La balanza no enciende.
Cable de interconexión desconectado o mal ajustado en la balanza.
Revisar conexión. Ajustar cable conector si es del caso.
La toma eléctrica sin corriente electrica
Verificar alimentación eléctrica.
La lectura del peso es incorrecta.
La balanza no fue puesta en cero antes de la lectura.
Colocar en cero la balanza; repetir la medida.
La balanza mal calibrada.
Calibrar de acuerdo con el procedimiento recomendado
por el fabricante.
La balanza desnivelada.
Nivelar la balanza.
La balanza no muestra en pantalla las unidades deseadas de medida.
Unidades mal seleccionadas.
Revisar el procedimiento definido por el fabricante para seleccionar la unidad de medida requerida.
La unidad requerida no habilitada.
Habilitar la unidad de medida de acuerdo al procedimiento definido por el fabricante.
La lectura de la balanza es inestable.
Vibración en la superficie del mesón.
Colocar la balanza sobre una superficie estable.
Puerta frontal de la balanza abierta.
Cerrar la puerta frontal para efectuar la medición.
6.8.8 HORNO DE CALOR SECO:
Frecuencia: Semanal
Tabla de solución de problemas:
Problema
Causa probable
Solución
No hay energía
La estufa no está conectada
Conectar estufa a toma eléctrica
El interruptor de encendido se encuentra apagado
Accionar el interruptor de encendido.
Disyuntor defectuoso
Cambiar el disyuntor.
Tarjeta de control defectuosa
Sustituir tarjeta de control.
Cable conector abierto
Revisar/reparar cables conectores
Temperatura errática elevada
Controlador defectuoso
Sustituir controlador
6.9 REGISTRO
Anexo 6
CONTROL DE CALIDAD DEL ANALISTA:
El personal es el factor más importante en la calidad del trabajo en el laboratorio de microbiología. El personal debe tener una dedicación y actitud positiva hacia el trabajo, capacidad académica, actualización constante y contar con los elementos indispensables para su labor
La competencia del personal de microbiología, debe ser certificada por la revisión de su hoja de trabajo, la interpretación de muestras desconocidas, su habilidad técnica.
7.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
7.2 Periocidad del control:
El control de calidad del personal a cargo del procesamiento de las muestras microbiológicas se realizara trimestralmente.
7.3 Procedimientos y acciones correctivas ante desviaciones en el procesamiento y resultados del analisis evaluado
Se realizara el control de calidad del analista por duplicidad de muestra, esto será de forma trimestral, en el cual se le entregara al personal a cargo del procesamiento una cantidad determinada de cepas para su identificación y susceptibilidad.
El reporte del resultado será entregado a los 15 días después de habérsele entregada el panel de evaluación.
Dichas cepas habrán sido estudiadas e identificadas por el personal a cargo de control de calidad del área de microbiología.
Acciones Correctivas:
Competencia técnica:
A) La dirección del laboratorio debe asegurar la competencia del personal que participa en la realización del ensayo, opera equipos, evalúa los resultados y firma los informes de ensayos.
B) Cuando emplea personal en formación debe proveer adecuada supervisión.
C) La dirección debe autorizar al personal que realiza una determinada tarea; como ser realizar muestreo, el ensayo, emitir el informe, operar equipos, realizar interpretaciones.
D) La dirección debe definir los requisitos mínimos de nivel de estudio, calificación y experiencias necesarias para las personas que ocupan puesto de trabajo clave en el laboratorio (perfiles de puesto) y mantenerlos actualizados.
E) La competencia del personal debe ser evaluada en forma continúa por ejemplo a través de controles de calidad, ensayos intralaboratorios e interlaboratorios,
F) La formación a ser adquirida deberá orientarse a garantizar la competencia en las técnicas y métodos realizados por el personal involucrado en el ensayo.
Capacitación del personal:
1. El personal deberá contar con conocimientos, experiencia y competencia de acuerdo a la tarea y responsabilidades que tenga asignadas.
2. Todo el personal técnico debe recibir un adecuado entrenamiento que incluyen técnicas básicas de microbiología como la manipulación en condiciones de esterilidad y adecuado criterio para dicha disciplina.
7.4 Registro:
Anexo 7
8 CONSERVACION DE CEPAS DE TRABAJO:
La mayoría de los procedimientos en Microbiología Clínica, dependen de que los microorganismos viables en el cultivo sean capaces de mantener sus características morfológicas, fisiológicas y que sean típicas y reproducibles.
Para ayudar en este control, las Cepas Estándar de Control de Calidad, son un componente esencial de un proceso de validación.
Generalmente se utilizan cepas de referencia como las ATCC y si son cepas aisladas de pacientes, es necesario tener un registro de la bacteria que incluye nombre, lugar de aislamiento, reacciones bioquímicas y patrón de sensibilidad a los antibióticos, forma de almacenaje, fecha de último repique
En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos específicos:
· Características típicas.
· Características estables.
· Reproducibilidad
8.1 Responsable:
Personal encargado del procesamiento de las muestras microbiológicas.
8.2 Periocidad del control:
El control de calidad de las cepas se realizara mensualmente
8.3 Procedimientos y acciones correctivas
Métodos de Conservación de Cepas Bacterianas:
8.3.1 Cultivo Stock
8.3.1.1 Ultracongelamieto:
Hacer una suspensión fuerte de la colonia pura en caldo TSB conteniendo 10 a 15% de glicerol o sustituto. Dispensar en pociones de 0.5 ml en pequeños tubos con rosca y coloque en lo profundo del congelador a -45°C..
8.3.2 Cultivos Semi stock:
8.3.2.1 Congelamiento en congelador convencional:
Los congeladores convencionales pueden mantener una temperatura entre-10 a –25°C. Los cultivos se preparan de la misma manera como en el caso de la ultracongelación y son colocados en el congelador. El método permite la sobrevivencia de bacterias y levaduras en algunos casos por años y en la mayoría de las veces por al menos de 6 a 12 meses.
8.3.2.2 Cultivo en CTA:
Se preparan tubos con rosca conteniendo Cisteína- Tripticasa y Soya agar. Inocular el cultivo puro y joven e incube por 18 a 24 horas para obtener un crecimiento moderado, afloje la tapa y mantenga a temperatura ambiente o preferiblemente en refrigeración, si es posible en la oscuridad.
Microorganismos menos delicados sobreviven bien por un año y los fastidiosos por 6 meses.
8.3.2.3 Bacterias delicadas :
Los cultivos de trabajo diario de organismos delicados como N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae, S. pneumoniae y algunos menos delicados como el S. pyogenes, son preparados a partir del stock e incubados por 24 horas en medios apropiados como agar chocolate en ambiente de CO2 , para luego ser colocados en refrigeración. Después de una serie de 6 transplantes consecutivos, se debe preparar otro cultivo para uso diario a partir de la cepa en stock.
8.3.2.4 Bacterias anaeróbicas:
Los cultivos para trabajo diario de la mayoría de las bacterias anaeróbicas, pueden ser mantenidos en medio de carne cocida o en Tioglicolato con 0.5% de carbonato de sodio adicionado después de esterilizar por autoclave.
Los cultivos se incuban por 24 a 48 horas y guardados a temperatura ambiente.
INDICADORES:
La evaluación de los resultados del control de calidad en sus diferentes aspectos se realizara mediante indicadores de estructura, proceso y resultado.
9.1 Indicador de estructura:
Numero de informes del programa de control de calidad durante el año evaluado:
· Meta: Se realizara 4 informes por año (informes trimestrales)
· Fuentes de verificación: Informes de control de calidad interno del laboratorio de microbiología presentados a la jefatura del laboratorio
9.2 Indicadores de proceso:
Numero de actividades del programa de control de calidad interno implementadas en el año.
· Meta: Ha implementado un mínimo de 3 actividades que incluyen el control de calidad de medios, tubos e identificación y susceptibilidad antimicrobiana
· Fuentes de verificación: Registros del control de calidad según actividad evaluada.
9.3 Indicadores de resultados:
% de concordancia en identificación:
· Meta: Mayor del 80% de concordancia en el primer año de implementado el programa de control de calidad interno.
· Fuente de verificación : Registro del control de calidad
% de concordancia en la interpretación de la susceptibilidad:
· Meta: Mayor del 80% de concordancia en el primer año de implementado el programa de control de calidad interno.
· Fuente de verificación : Registro del control de calidad
ANEXOS
Anexo 1
REGISTRO DE PREPARACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO
Y OTROS
FECHA DE PREPARACIÓN ......./......./…....
MEDIO PREPARADO
MATERIA PRIMA
MARCA
LOTE N°
GRS/L
CANTIDAD TOTAL
pH medio preparado
CANTIDAD:_____________________ml N° TUBOS:_____________________ N° PLACAS:_______________
ESTERILIZACIÓN
AUTOCLAVE: ___________libras presión/tiempo
CONTROL DE CALIDAD
FECHA DE CONTROL DE CALIDAD ....../..../......
pH
Aspecto
Consistencia
Volumen
Esterilidad (24)
Esterilidad (48)
CONTROL DE CRECIMIENTO
Cepa Control
Satisfactorio
Insatisfactorio
CONTROL DE HEMOLISIS
Cepa Control
Beta
Alfa
Negativa
CONTROL DE INHIBICION
Cepa Control
Satisfactorio
Insatisfactorio
LOTE ACEPTADO: ________________ LOTE RECHAZADO: _______________
OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________
FIRMA PERSONA RESPONSABLE:_____________________________________________________________
Anexo 2
REGISTRO DE PREPARACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO
EN TUBOS
FECHA DE PREPARACIÓN ......./......./…....
MEDIO PREPARADO
MATERIA PRIMA
MARCA
LOTE N°
GRS/L
CANTIDAD TOTAL
pH medio preparado :___________ pH medio preparado:________________
CANTIDAD:__________________ml CANTIDAD:__________________ml
N° TUBOS:___________________ N° TUBOS:___________________
ESTERILIZACIÓN
AUTOCLAVE: ___________libras presión/tiempo
CONTROL DE CALIDAD
FECHA DE CONTROL DE CALIDAD ....../..../......
MEDIO
pH
Aspecto
Consistencia
Volumen
Esterilidad (24)
Esterilidad (48)
CONTROL DE REACCION
Cepa Control
TSI
Reacción Esperada
LIA
Reacción Esperada
CITRATO
Reacción Esperada
Cepa Control
SIM
Reacción Esperada
BILIS ESCULINA
Reacción Esperada
Reacción Esperada
LOTE ACEPTADO: ________________ LOTE RECHAZADO: _______________
OBSERVACIONES: ___________________________________________________________________________
FIRMA PERSONA RESPONSABLE:_____________________________________________________________
Anexo 3
REGISTRO DE CONTROL DE CALIDAD EM IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS
CEPA N º...........
Institución:
Fecha de recepción de cepas: Fecha procesamiento:
1. IDENTIFICACION DE GENERO Y ESPECIE: PRUEBAS BIOQUIMICAS
PRUEBA
RESULTADO: +/-
PRUEBA
RESULTADO: +/-
2. RESULTADOS
IDENTIFICACION FINAL DE LA CEPA No.
GENERO ESPECIE
ANALISTA:…………………………………………
Anexo 4
REGISTRO DE CONTROL DE CALIDAD DE DISCOS DE SENSIBILIDAD
FECHA:
RESPONSABLE:
E. coli S. aureus P. aeruginosa E.coli E. faecalis
MARCA LOTE F/V ATCC 25922 ATTC 25923 ATCC 28573 ATCC 35218 ATCC 29212
mm C.C mm mm C.C mm mm C.C mm mm C.C mm mm C.C mm
Amikacina 30 ug
Amoxicilina/ac clavul 20/10ug
Ampicilina 10 ug
Ampicilina/sulbactan 10/10ug
Aztreonam 30 ug 28-36 - 23-29 -
Carbenicilina 100 ug 23-29 - 18-24 -
Cefaclor 30 ug 23-27 27-31 - -
Cefazolina 30 ug 21-27 29-35 - -
Cefepime 30 ug 31-37 23-29 24-30 -
Cefixime 5ug 23-27 - - -
Cefoperazona/sulbactam 28-34 24-33 23-29 -
Cefotaxima 30ug 29-35 25-31 18-22 -
Cefoxitin 30 ug 23-29 23-29 - -
Ceftazidime 30 ug 25-32 16-20 22-29 -
Ceftriaxona 30 ug 29-35 22-28 17-23 -
Cefuroxima 30 ug 20-26 27-35 - -
Cefalotina 30 ug 15-21 29-37 - -
Cloranfenicol 30 ug 21-27 19-26 - -
Ciprofloxacina 5 ug 30-40 22-30 25-33 -
Clindamicina 2 ug 24-30 - -
Colistina 10 ug 11.-17 11.-17
Doxiciclina 30 ug 18-24 23-29
Eritromicina 15 ug - 22-30 - -
Fosfomicina 200ug 22-30 25-33 - -
Gentamicina 10ug 19-26 19-27 16-21 -
Imipenem 10ug 26-32 - 20-28 -
Levofloxacina 5 ug 29-37 25-30 19-26 -
Linezolid 30ug - 25-32 - -
Lomefloxacina 10 ug 27-33 23-29 22-28 -
Meropenem 10 ug 28-34 29-37 27-33 -
Ac nalidixico 30ug 22-28 - - -
Nitrofurantoina 300 20-25 18-22 - -
Norfloxacina 10 ug 28-35 17-28 22-29 -
Oxacilina 1ug - 18-24 - -
Penicilina 10 U - 26-37 - -
Polymyxin B 300 U 13-19 - 14-18
Rifampicina 5 ug 8-1O 26-34 - -
Sulfisoxazole 250ug o 300ug 15-23 24-34 - -
Teicoplanina 30 ug - 15-21 - -
Tetraciclina 30ug 18-25 24-30 - -
Ticarcilina 75 ug 24-30 - 21-27 6
Trimet/sulfamet 1.25/23.75ug 23-29 24-32 - - >=20 *
Vancomicina 30ug - 17-21 - -
Gentamicina (100 ug) - - - - 16-23
Estreptomicina (300 ug) - - - - 14 -20
Estreptomicina (10 ug) 12-20 14-22 -
Claritromicina 15 ug - 26-32 -
Ofloxacina 5 ug 29-33 24-28 17-21
Cefoperazona 30 ug 28-34 34-33 23-29
Meticilina 10 ug - 17-22 -
Mezlocilina 75 ug 23-29 - 19-25
Anexo 5
REGISTRO DE PREPARACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE COLORANTES
FECHA DE PREPARACIÓN ......./......./…....
COLORANTE PREPARADO
MATERIA PRIMA
MARCA
LOTE N°
GRS/L
CANTIDAD TOTAL
CANTIDAD:_____________________ml
CONTROL DE CALIDAD
FECHA DE CONTROL DE CALIDAD ....../..../......
Lamina Control
Gram
Resultado Esperado
LAMINA 1
LAMINA 2
LAMINA 3
LAMINA 4
Lamina Control
Ziehl Neelsen
Resultado Esperado
LAMINA 5
LAMINA 6
LAMINA 7
LAMINA 8
ANEXO 6
FORMATO
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
REGISTRO DE TEMPERATURA
Edición:
Pág. 1 de 1
EQUIPO
CODIGO
RANGO
AÑO
ESTUFA HERAEUS
35 A 37 ° C
2007
FECHA
INSTRUMENTO
(NTERNO-EXTERNO (CODIGO)
T° 1
T°2
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
FORMATO
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
REGISTRO DE TEMPERATURA
Edición:
Pág. 1 de 1
EQUIPO
CODIGO
RANGO
AÑO
REGRIGERADORA COLDEX
2-8 ° C
2007
FECHA
INSTRUMENTO
(NTERNO-EXTERNO (CODIGO)
T° 1
T°2
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
USO DE AUTOCLAVE
ESTERILIZA S.A.
Edición:
Pág. 1 de 1
UBICACION
CODIGO
MES
AMB. ALTO RIESGO
FECHA
INICIO
TEMP
PRESIÓN
FIN
TOTAL
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
--------------------- -----------------------
Responsable Jefe de Área
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
USO DE BALANZA ANALÍTICA OHAUS
Edición:1
Pág. 1 de 1
UBICACION
CODIGO
MES
FECHA
INICIO
FIN
TOTAL
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
LABORATORIO DE REFERENCIA REGIONAL DISA III LIMA NORTE
REGT N°
USO DE CENTRÍFUGA MARATHÓN 21000
Edición:
Pág. 1 de 1
UBICACION
CODIGO
MES
FECHA
INICIO
FIN
TOTAL
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
------------------------ --------------------------
Responsable Jefe de área
LABORATORIO REFERENCIAL
DISA III
REGT N°
USO DEREGISTRO DEL HORNO
Edición: 1
Pág. 1 de 1
UBICACION
MES
FECHA
1ra LECT. Tº
2da. LECT. Tº
TIEMPO DE ESTERILIZACIÓN (45 MINUTOS APROX.)
RESPONSABLE
OBSERVACIONES
HORA INICIO
HORA DE TÉRMINO
TOTAL MENSUAL
TOTAL HORAS
DE USO
-------------------- ------------------
Responsable Jefe de Área
Anexo 7
Acción Correctiva
Nº Correlativo
Acta Comité de Calidad Nº
Fecha
Referencia
Causa
Acción de Mejoramiento
Implementación
Fecha
Responsable
(Nombre/Cargo/Firma)
Seguimiento / Cierre de la acción correctiva
Seguimiento de la acción correctiva
Fecha de seguimiento
Implantación
Nombre / Cargo / Firma
SI
NO
Comprobación de la eficacia de la acción de mejoramiento
Fecha de cierre
Fecha comprobación de eficacia
Grado de eficacia
Nombre y Firma
Encargado de calidad
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